谷丙轉氨酶（GPT，E.C.2.6.1.2）特性及測定方法（提供檢測試劑盒）

谷丙轉氨酶（

glutamate pyruvic transaminase）

又稱丙氨酸轉氨酶L-丙氨酸轉氨酶；一酮戊二酸轉氨酶；GPT；E。C。2。6。1。2。

丙轉氨酶（ALT）主要存在於各種細胞中，尤以肝細胞為最，整個肝臟內轉氨酶含量約為血中含量的100倍。正常時，只要少量釋放入血中，血清中其酶的活性即可明顯升高。在各種病毒性肝炎的急性期、藥物中毒性肝細胞壞死時，ALT大量釋放入血中，因此它是診斷病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指標。肝細胞內谷丙轉氨酶的濃度比血清高1000～3000倍。只要有1%的肝細胞壞死，便可使血中酶活性增高1倍，因此轉氨酶（尤其是ALT）是急性肝細胞損害的敏感標誌。

一、概況

1。反應式

甘氨醯-甘氨酸緩衝液，pH8。0，25℃；磷酸緩衝液最適pH值為7。3~7。8。

2。米氏常數

3。專一性

豬心谷丙轉氨酶對L-丙氨酸與L-穀氨酸是頗為專一的。曾發現若用a-酮戊二酸作底物時，活性顯示得低（1~2%），同樣地，無論是在正向反應中，用2-氨基丁酸、L-已氨酸、L-鳥氨酸、 L-天冬氨酸作底物；還是在逆向反應中，用丙酮酸以及下列各種化合物，諸如L-2-氨基丁酸、L-戊氨酸、L-已氨酸、L-天冬氨酸、DL-B-羥基穀氨酸或L-a-氨基已二酸作底物時，此酶亦表現出活性較低。若用牛心來源的谷丙轉氨酶所得結果亦是同樣的情況。曾發現任何一種谷丙轉氨酶與甘氨酸、L-丙氨酸、 L-絲氨酸、L-亮氨酸、L-天冬醯胺、L-穀氨酸、L-穀氨酸鹽以及其它氨基酸皆不起反應。

4。抑制劑

L-穀氨酸鹽、L-丙氨酸、L-已氨酸、L-戊氨酸、L-2-氨基丁酸、L-氨基已二酸鹽、甘氨酸以及L-天冬氨酸鹽皆具有競爭性抑制作用。

5。純度要求

所需的純度至少應為每毫克蛋白含80單位活性，而所含L-穀氨酸脫氫酶（GIDH）、穀草轉氨酶（GOT）、L-乳酸脫氫酶（LDH）或L-蘋果酸脫氫酶（MDH）量應少於0。01%。

6。意義

由於肝臟組織中所含的GPT量為心臟、肌肉、腎組織的三倍所以GPT升高幾乎總是由肝病引起的。

血清中此酶的正常值（30℃）為5~24毫單位/毫升，而患病毒性肝炎病人中，則可升高至1000~4，000單位。正如在第一節中已介紹的GOT測定，當GOT與GPT的活性比值小於1時，一般平均比值為0。64，即表示患有急性肝炎。

患心肌梗塞病而沒有併發肝病的病人，曾觀察到GPT水平仍為正常。

為了對肝細胞病變與梗阻性黃疸進行鑑別，應同時測量GPT與GOT化驗專案，這樣，診斷可靠性更高。因此，在觀察肝病過程中，此二項試驗是很重要的。

7。穩定性

將此酶儲存在32M，pH6的硫酸銨懸浮液中，於4℃下可穩定3~6個月。

二、測定方法

1。分光光度法

於340nm處測量吸光率的下降值，即吸光率差值A/分鐘，此即等於 GPT活性。為了使異常的測定值減少至2~4%，則所測得的變異係數約為5。5%。

可採用比色測定法，即將丙酮酸與2，4-二硝基苯肼反應生成腙，於 500~550nm處測定腙的吸光率，其變異係數約為20%。在測定 GOT 的反應中，丙酮酸反應生成的2，4-二硝基苯腙可用甲苯萃取，而後，於500~550nm處測量色度值。

2。熒光法

根據上述LDH（E。C。1。1。1。27）與NADH相偶聯的酶促反應，可對GPT進行熒光測定，於是在激發波長365nm處或發射波長460nm處跟蹤NADH熒光度的下降值。