電鏡掃描檢測的操作步驟及使用方法詳解

電鏡掃描是1965年發明的較現代的細胞生物學研究工具，它具有制樣簡單、放大倍數可調範圍寬、影象的解析度高、景深大等特點。近年來，掃描電鏡已廣泛地應用在生物學、醫學、等學科的領域中。

電鏡掃描主要是透過發射電子聚焦光束來掃描樣品的表面形態。電子束與樣品表面的樣子發生作用，產生多種能夠被檢測的訊號，這些訊號就包含了樣品的表面形態和組成染色。

電鏡掃描檢測

電鏡掃描檢測實驗流程

1。 樣品的初步處理

a。 取材樣品面積可達8mm×8mm，厚度可達5mm。對於易捲曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等，可固定在濾紙或卡片紙上，以充分暴露待觀察的組織表面。

b。 樣品的清洗

（1）用等滲的生理鹽水或緩衝液清洗；

（2）用5%的蘇打水清洗；

（3）用超聲震盪或酶消化的方法進行處理。

c。 固定：固定所用的試劑和透射電鏡樣品製備相同，常用戊二醛及鋨酸雙固定。由於樣品體積較大，固定時間應適當延長。也可用快速冷凍固定。

d。 脫水：樣品經漂洗後用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水，然後進入中間液，一般用醋酸異戊酯作中間液。

電鏡掃描檢測

2。 樣品的乾燥

a。 空氣乾燥法空氣乾燥法又稱自然乾燥法，就是將經過脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發乾燥。這種方法的最大優點是簡便易行和節省時間；它的主要缺點是在乾燥過程中，組 織會由於脫水劑揮發時表面張力的作用而產生收縮變形。因此，該方法一般只適用於表面較為堅硬的樣品。

b。 冷凍乾燥法

（1）置於冷凍保護劑中：將樣品置於冷凍保護劑中浸泡數小時。常用的冷凍保護劑為10%～20%二甲基亞碸水溶液，或15%-40%甘油水溶液。

（2）驟冷：將經過保護劑處理的樣品迅速投入用液氮預冷至（150℃的氟利昂冷凍劑中，使樣品中的水分很快凍結。

（3）乾燥：將已凍結的樣品移到冷凍乾燥器內已預冷的樣品臺上，抽真空，經幾小時或數天後，樣品即達到乾燥。本方法不需要脫水，避免了有機溶劑對樣品成分的抽提作用，不會使樣品收縮，也是較早使用的方法。但是，由於花費時間長，消耗液氮多，容易產生冰晶損傷，因此未被廣泛應用。

3。 樣品的導電處理（真空鍍膜法）

真空鍍膜法是利用真空膜儀進行的。其原理是在高真空狀態下把所要噴鍍的金屬加熱，當加熱到熔點以上時，會蒸發成極細小的顆粒噴射到樣品上，在樣品表面形成一層金屬膜，使樣品導電。噴鍍用的金屬材料應選擇熔點低、化學效能穩定、在高溫下和鎢不起作用以及有高的二次電子產生率、膜本身沒有結構。現在一般選用金或金和碳。為了獲得細的顆粒，有用鉑或用金-鈀、鉑-鈀合金的。金屬膜的厚度一般為10 nm～20 nm。真空鍍膜法所形成的膜，金屬顆粒較粗，膜不夠均勻，操作較複雜並且費時，目前已經較少使用。

4。 電鏡掃描檢測拍攝。

電鏡掃描